过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生

目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC,慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液,将L02与上清液共培养,通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%）,分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化,通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC,并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01）,MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组,经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏,其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01）,同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。     

靶向PCSK9基因shRNA慢病毒载体的构建及其对PCSK9基因表达的沉默

目的设计以PCSK9基因为靶点的短发夹状RNA（shRNA）,构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对PCSK9基因表达的影响。方法将3条人PCSK9基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pLentilox3．7,与pCDNA3-hPCSK9．FLAG质粒用Lipofectamine2000共转染293细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA。此重组质粒与pCre—VSV-G、pLoxp．CMV—R8．91经293细胞包装后,产生的重组慢病毒感染293细胞,48h后转染pCDNA3．hPCSK9-FLAG质粒,Western blotting法检测人PCSK9基因表达的情况。结果经双酶切鉴定,构建了PCSK9shRNA慢病毒载体pLentilox—hPC—SK9,鉴定出hshRNA-2为最有效的shRNA。重组的慢病毒能明显的抑制人PCSK9的表达。结论慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性的阻断PCSK9的表达,为进一步探讨PCSK9特异性的shRNA治疗脂代谢异常疾病奠定了基础。     

儿童肝脏巨大局灶性结节增生一例

<正>肝脏原发性肿瘤在小儿肿瘤中占1%~2%~([1])。FNH是肝脏的良性病变,成年人中比较常见,而在儿童肝脏肿瘤中只占2%左右~([2])。FNH为边界清楚的小叶状肿瘤,典型的FNH包含胆管和中央星状瘢痕,以及在增生过程中增殖的血管~([3])。Chen等~([4])研究表明,不确定FNH诊断的儿童患者应该进行手术治疗。我们收治1例患有巨大FNH的6岁儿童患者,通过影像学检查和穿刺活检无法明确诊断,最后经外科手术治疗证实。现报道     

肝移植术后并发症的观察及护理

<正>中国是世界上肝脏疾病发病率最高的国家之一,各类肝脏疾病最终发展成为终末期肝病,肝移植是国际上公认的治疗终末期肝病唯一有效的方法[1]。随着肝脏移植手术技术的成熟,对移植术后并发症的治疗与护理尤为重视,因此,做好肝移植术后并发症的预防、观察与护理是肝移植患者术后能否顺利恢复的关键。我科2012年8月至2014年12月共开展肝移植手术156例,术后部分患者发生了肺部感染、急性胰腺炎、心     

急性胆囊炎经腹腔镜胆囊切除手术体会

目的：随着腹腔镜手术技术的不断提高,急性胆囊炎已成为腹腔镜手术的适应证。文中将探讨急性胆囊炎患者行腹腔镜胆囊切除术（ laparoscopic cholecystectomy , LC）的处理措施并总结经验。方法回顾性分析2002年1月至2013年8月解放军第八一医院普通外科收治的387例行LC的急性胆囊炎患者的临床资料。结果387例中结石嵌顿359例,152例患者炎症发作超过72 h,中转开腹10例。手术时间30～200 min,平均（63．09±26．62）min;术中出血10～500 mL,平均（51．41±32．41）mL,放置腹腔引流管183例。随访3～24个月无并发症发生,手术治愈率100％。结论合理把握急性胆囊炎LC的原则及技巧可提高手术安全性,减少手术带来不良反应的发生。     

胰腺实性假乳头状瘤的临床特点及预后分析

目的 探讨胰腺实性假乳头状瘤(SPT)的临床病理和免疫组化特征、组织起源、生物学行为及临床治疗方法 和预后.方法 对18例SPT组织标本进行HE染色和免疫组化SP法染色,收集患者的临床资料,并对患者进行随访.结果 18例SPT患者中,女性16例,男性2例,发病年龄9～65岁,平均25.3岁.多以腹痛和上腹部包块为主要症状.肿瘤常有包膜,囊实相间,镜下可见肿瘤由假乳头和囊实性区混合组成,瘤细胞围绕纤维血管轴心形成特征性假乳头结构.免疫组化检测结果 显示,多数肿瘤表达α-抗胰蛋白酶(α-AT)、α-抗糜蛋白酶(α-ACT)和波形蛋白(Vim),阳性率均为94.4%.18例SPT患者全部获得随访,随访时间3个月至10年不等,5例术后复发,均予手术切除.18例SPT患者中,死亡4例,中位生存时间为23.0个月,5年生存率为72.2%.患者年龄、肿瘤大小、SPT特殊的病理表现、大血管侵犯和肿瘤转移与胰腺SPT患者生存期有关.结论 SPT为一种低度恶性肿瘤,可能起源于胰腺多潜能干细胞.好发于青少年女性,有独特的临床病理表现,手术切除后预后好.     

镇江市首例肝移植临床报告

自 196 3年美国Ｓｔａｒｚｌ实施第 1例临床肝移植以来 ,现每年平均以 80 0 0例次的速度递增 ,迄今已达 8万余例。肝移植已成为治疗终末期肝病的最有效手段。结合我院最近成功实施的 1例临床肝移植经验 ,就如何提高术后围手术期的生存率进行分析回顾。1　临床资料1.1　病史　受体原发病是乙肝肝硬化、脾大、脾功能亢进的男性患者 ,4 1岁 ,术前伴有不能消退的肝性黄疸和顽固性胸腹腔积液 ,除肝功能不全合并脾亢“三血象”减少外 ,心、肺、肾等主要器官未发现损害。1.2　术前准备　成立专医、专护的医疗小组。手术组人员进行大动物肝移植模拟…     

RNAi沉默SSP411基因对人胆管癌HuCCA-1细胞增殖的影响

目的 研究RNA干扰(RNAi)对SSP411进行基因沉默后胆管癌细胞体外增殖的变化.方法 构建针对SSP411的RNAi质粒,将离体培养的胆管癌HuCCA-1细胞分为阴性对照(C)组、shRNA-SSP411 1转染(A1)组和shRNA-SSP411 2转染(A2)组.采用RT-PCR和Western blot法分别检测HuCCA 1细胞中SSP411 mRNA和蛋白表达;通过MTT实验、平板克隆形成和软琼脂克隆球形成能力检测,观察目的基因被下调后细胞增殖能力的变化.结果 A1、A2组细胞的SSP411 mRNA和蛋白表达较C组明显降低.与C组相比,A1、A2组胆管癌细胞生长被显著抑制(P＜0.01);A1、A2组平板克隆形成数目低于C组[(66±18)个、(70±17)个vs.(115±16)个](P＜0.01或P＜0.05);与C组相比,A1、A2组软琼脂克隆球数目显著下降[(96±29)个vs.(53±9)个、(43±13)个](P＜0.05).结论 RNAi介导的SSP411基因沉默可抑制人胆管癌HuCCA-1细胞的增殖能力;SSP411可作为胆管癌治疗的新靶点.     

EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定

目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因, 并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A, 转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株.方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因, 克隆到测序载体pMD18-T中, 经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中, 与两辅助病毒载体PHIT456、 PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T, 测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929, 经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆, 用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况.结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×108 cfu/L, 感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A.结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础, 也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路.     

CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响

目的探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响。方法按接种变异瘤株不同,将BALB／C小鼠随机分成A组（H22．Wt细胞）、B组（H22-neo细胞）、C组（H22-CD80／CD86^＋细胞）、D组（H22．CD137L^＋细胞）、E组（H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞）5组,建立H22．BALB／C小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组。观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况。通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响。结果E组首次接种成瘤率仅有50．0％,显著低于其余4组（P〈0．01）。首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退。E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退。其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退。与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善（P〈0．01）,而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义（P〈0．01）;第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组（P〈0．01）。E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100％排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22／Wt细胞,小鼠仍然100％排斥肿瘤。结论CD80＋CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性。